张华荣陈正明文海燕郑义谢颖重庆国际旅行卫生保健中心（重庆，401147）
摘要目的拟通过使用WB对隐性梅毒TPPA/TP－ELISA检测结果不一致标本的检测比较，探 讨WB对于隐性梅毒抗体检测结果的确证价值。方法1．先用TPPA或TP－ELISA检测血清或血
浆标本，对阳性标本分别交叉使用另一种方法复核。对两种方法检测结果不一致的60份标本，再用 WB进行检测。2．对NCCL提供的梅毒标准血清盘，使用TP－ELISA和TPPA同时检测，WB结果
采用NCCL提供。结果1．用TP－WB对60例TPPA/TP－ELISA检测不一致的标本进行检测，51份
TP－ELISA阳性，TPPA阴性的标本，WB检测结果是32份阳性，9份不确定，10份阴性;9份TP－ELISA阴性，TPPA阳性的标本，WB检测结果是8例阳性，1例可疑。2．血清盘40份标本，WB阳性
26例，阴性14例，26例阳性标本分别用TPPA和ELISA检测，TPPA阳性24例，阴性2例;TP－ELISA
检测26例全部阳性。而14例WB检测阴性标本分别用两种方法检测时，TPPA与之完全相符，TPELISA出现两例阳性。结论WB可作为潜伏期梅毒检测TPPA、TP－ELISA二者结果不致时的
确认方法。
关键词免疫印迹法隐性梅毒
中图分类号R392文献标识码B doi10．3969/j．issn．1008－5777．2013．02．007
1前言
近年来，梅毒发病率一直高居不下。根据卫生部公布的卫生统计年鉴，2006年、2007年、2008年、2009年梅毒发病率分别为12．80/10万、15．88/10万、19．49/10万、20．07/10万，连续4年保持上升态势，位列法定报告传染病发病率第三，性病之首。因此，梅毒防控任务依然严重。
梅毒的诊断标准中，有国家标准，卫生行业标准及口岸行业标准等。对于潜伏期（隐性）梅毒，国家标准为多种实验室检测，卫生标准仍然以病史与临床症状结合相应实验室检查进行确诊［1，2］。在口岸检疫中，被检测人中梅毒多属于隐性感染者或者潜伏期梅毒，病史与临床资料难以获得，临床病态大多不明显，口岸行业更依赖于实验室检测，目前是通过对血清的初筛实验（RPR/TRUST/ELISA）和确证实验（暗视野微生物检查/TPHA/TPPA）来进行［3］。梅毒的特异性
周庄古镇晚上要门票吗抗体试验有TP．HA、TPPA、TP－ELISA、FTA－ABS和WB等。在几种特异性抗体检测方法中，FTA－ABS为公认的金标准，但FTA－ABS对硬件和人员的要求都较高，还无法普及，因此常用的方法为：TPHA、TPPA、ELISA和WB。对于几种特异性抗体检测方法的意义、准确性、一致性等认识，以及检测结果不一致时，应该采用什么方法作为最终判断的“金标准”，由于目前的国标GB15974－1995、卫生部行业标准WS273－2007、口岸行业标准SN/ T1210－2003都没有做出明确的规定，导致了一定的混乱和无所适从。WB检测梅毒抗体的研究已经很多，其灵敏度与特异度都很高，但目前WB仍未能作为梅毒检测的确证手段。本研究拟通过TPPA、ELISA检测结果的比较，以及TPPA、ELISA检测结果不一致的血清标本进行WB检测的比较，探讨几种WB对于潜伏期梅毒的确证价值。
2材料与方法
2．1材料
2．1．1标本来源
基金项目：国家质量监督检验检疫总局2008IK207
重庆国际旅行卫生保健中心2009年11月到2010年6月出境劳务、留学、公务等11680人。标本采集、处理采集体检人静脉血3－4mL，存于促凝管中，3500rpm5min分离血清进行试验。
试剂酶联免疫吸附试验试剂（TP－ELISA双抗原夹心法）由北京万泰生物药业股份有限公司生产；颗粒凝集试验试剂（TPPA）由日本富士瑞必欧公司生产，珠海丽珠试剂有限公司代理；免疫印迹试验试剂（TP－WB IgG）由德国欧蒙医学实验诊断股份公司（EUROIMMUN）生产，北京欧蒙生物技术有限公司销售。
2．1．2设备
酶标仪：HT2，奥地利ANTHOS公司生产；全自动酶免分析系统：FAME24/20，瑞士哈美顿博纳图斯股份公司生产。
2．2研究方法
2．2．1先用TPPA或TP－ELISA检测血清标本，对阳性标本分别交叉使用另一种方法复核。对两种方法检测结果不一致的60份标本，再用WB进行检测。2．2．2对NCCL提供的梅毒标准血清盘，使用TP －ELISA和TPPA同时检测，WB结果采用NCCL 提供。
昆明风景区旅游景点2．2．3所有试验方法严格按照说明书完成。对TP －WB判断由一人检测，一人复核，判读标准为：在15kDa，17kDa，45kDa（tmpA），47kDa条带中，没有出现肉眼可见条带为阴性，1条为不确定，2条及以上为阳性。
2．3质量控制
TP－ELISA方法室内质控品购自北京康彻斯坦，按照说明书要求进行。参加国家疾病预防控制中心，重庆市临检中心的能力验证活动各三次，每次5份血清样本，结果均完全满意。
3结果
3．1TPPA/TP－ELISA/TP－WB对60例临床标本检测结果（表1）
用TP－WB对60例TPPA/TP－ELISA检测不一致的标本进行检测，51份TP－ELISA阳性，TPPA阴性的标本，WB检测结果是32份阳性，9份不确定，10份阴性；9份TP－ELISA阴性，TPPA阳性的标本，WB检测结果是8例阳性，1例可疑。TP－ELISA阳性，TPPA阴性的标本中的2例经WB确认为阳性一个月后复查，TRUST检测结果也转阳。
表1TP－ELISA、TPPA与TP－WB检测结果比较（60例）血清检测结果份数
WB
+－可疑ELISA+
－
中国十大古城是哪十个51
9
32
8
10
9
1 TPPA+
浙江桐乡疫情－
9
51
8
32
10
1
9 3．2血清盘检测结果比较
血清盘40份标本，WB阳性26例，阴性14例，26例阳性标本分别用TPPA和ELISA检测，TPPA阳性24例，阴性2例；TP－ELISA检测26例全部阳性。而14例WB检测阴性标本分别用两种方法检测时，TPPA 与之完全相符，TPELISA出现两例阳性。见表2。
表2血清盘标本TPPA/TP－ELISA对TP－WB检测比较
TPPA TP－ELISA
标本数n+－标本数n+－
TP－W B
+
－
26
14
24
2
14
26
14
26
2
南京哪些地方值得去玩
12
合计402416402812注：血清盘TP－WB结果由卫生部临检中心提供。
4讨论
本次试验中，对40份血清盘标本检测结果显示，26份阳性样本，TPELISA与TPWB均全部检出，而TPPA只检出24份阳性，2份漏检，存在一定的假阴性；14份阴性样本，TP－ELISA检出2份假阳性，存在一定的假阳性率，而TPPA与WB均正确检出。在临床标本的检验中，51例TPELISA阳性TPPA阴性的标本，用WB复核（以WB自带说明书为标准）则32份阳性，有9份不确定，10份阴性；同上，9例TPELISA阴性TPPA阳性的标本，WB复核9例阳性，1例可疑，这个结果与检测血清盘的结果较一致。此结果也与国内众多文献报道一致，认为TPELISA的检测灵敏度高于TPPA，但是特异性比TPPA差。而TPWB的灵敏度和特异性均优于两者。
不同的研究者对于采用免疫印迹法所呈现的梅毒螺旋体特异性抗原区带结果报道存在一定的差异。谭爱国［4］刘意等［5］以47KDa，17KDa和14KDa三条带中出现两条及以上为阳性结果；白雪梅等［6］以
47KD、45KD、17KD、15KD四条带中出现两条及以上为阳性，一条为可疑，无条带则阴性，但他们都是使用的商品化的WB试剂盒。Josephine L．Back-house等建立WB方法检测梅毒抗体时，以TpN47，TpN44．5，TpN17，TpN15四条带中出现三条及以上为阳性，并且检测了TpN47，TpN44
．5，TpN17，TpN15单条带出现与梅毒的关系［1］；Elaine Antunes de Lemos等将WB检测梅毒的方法标准化［8］，以47KD，17KD和15kD出现一条以上即为阳性，并且分析了梅毒潜伏期、临床一至三期梅毒各时期IgG 条带的特征，指出WB方法不仅能作为血清学确认实验，还能用于区别梅毒的临床各期；Martina Herre-mans等［9］比较WB与19S FTA－ABS方法时，也以47KD，17KD和15kD出现一条以上即为阳性。
本研究的WB实验中，一共检测了P15、P17、P45、P47四种条带，除去四条带全部阴性的结果，出现条带阳性的结果共有50例，其中2例四条带全部出现，即检出了P15、P17、P45、P47四种抗体。从表3可见，P47条带检出的比例最高，即针对P47的抗体有较高的检出率。由于TPELISA和TPPA检测原理的差异，在血清中抗体不全时，则可能出现两者检测结果不一致的情况。
表3WB阳性血清中四条带阳性分布情况（60例）
条带P15P17P45P47
阳性例数2183147
比例21/608/6031/6047/60
阳性率35%13．3%51．7%78．3%
对于TP的血清学检测，ELISA灵敏度高，但特异性稍差，TPPA灵敏度稍低，但特异性高［10］；而WB 同时有高灵敏度与高特异度，用TP－WB检测血清，对梅毒的诊断有着特殊的意义。文献中用WB用于强阳性标本检测，灵敏度特异性均可达100%。本研究将WB用于两种筛查方法ELISA和TPPA结果不符的标本的检测，从结果发现，ELISA存在一定的假阳性率，而TPPA则存在一定的漏检，经TPPA判定为阴性而WB判为阳性的病例中，有2例一个月后复查TRUST变阳，有2例自述有梅毒感染史。但WB 检测过程较ELISA和TPPA繁琐，检测时间长，技术要求较高，对于数量不多的血清可以直接检测，但用于检测大量的临床样本则不太适合。用ELISA结合TPPA检测进行血清检测，对于二者结果不一致的时候，使用WB进行确认是可行的。
参考文献
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Evaluation of WB using in the confirmatory test for latent syphilis
Zhang Huarong Chen Zhengming Wen Haiyan Zheng Yi Xie Ying
Chongqing international travel healthcare center（Chongqing，401147）
Abstract Objective Confirmatory tests for latent syphilis have been carried out on samples with discordant re-sults when tested by TPPA and TP－ELISA to evaluate the value of WB method in latent syphilis test．Methods
The serum or plasma samples of latent syphilis are tested by TPPA or TP－ELISA first，and the positive samples are retested by another method．A total of60samples with discordant results in these tests are tested by WB．TPPA and TP－ELISA are used to test the standard serum panel supplied by NCCL，and the WB test results are from NCCL．Results51samples with TP－ELISA positive TPPA negative and9with TP－ELISA negative TPPA posi-tive are tested by WB method．32samples from the51samples are positive，9uncertain and10negative when test-ed by WB．8samples are positive and1negative in the9samples when tested by WB．There were26positive and
14negative samples in the40samples from the standard serum panel．24samples are positive and2negative when using TPPA to test the26positive samples．26positive samples are identified as positive by TP－ELISA．12sam-ples are negative and2positive when using TP－ELISA to test the14negative samples．And all negative samples are correctly identified by TPPA．Conclusion WB can be an accurate confirmatory test for latent syphilis samples when the testing results are discordant by TPPA and TP－ELISA tests．云南旅行社排名前十名及
Key words WB latent syphilis
2012－05－04
收稿日期
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2013年3月20日消息：上海黄浦江死猪漂浮事件让一度被忽视的中国养殖业污染问题浮出水面。该事件表明，养殖业污染正成为中国环保新挑战。
自3月7日网上曝出上海黄浦江上游水源保护地漂浮大量死猪后，短短几天之内，上海打捞出的死猪近万头，上游浙江嘉兴也已收集死猪3000多头。随着事情发展，越来越多的人开始关注养猪业带来的污染问题。
养殖业污染散布在农村各地，被称为面源污染。过去几年，中国各地对工业污染高度重视并采取了多种措施，但养猪这样的传统农业面源污染却没有引起足够重视，而事实上，畜牧业的污染危害并不比工业污染低。
记者在长三角最大的生猪养殖基地浙江嘉兴农村走访发现，由于家家户户都养猪，路边的垃圾堆、水渠、河塘散发着难闻的气味。
来自嘉兴市畜牧局的数据显示，目前嘉兴养猪户达到13万余户，每年饲养生猪超过700万头。猪粪和死猪处理成为当地政府最头疼的事之一。
嘉兴当地人说，嘉兴为上海乃至长三角地区的肉价稳定作出了贡献，但也为此付出了沉重的环境代价。
据中国环保部和农业部公布的数字，2010年，中国畜禽养殖业的化学需氧量和氨氮排放量分别达到1184万吨和65万吨，占全国排放总量的比例分别为45%、25%，占农业源的95%、79%。
而以养猪业为例，中国目前的养猪量占全球总量的一半，每年产生粪便6亿多吨。一头猪的排泄量相当于3－6个人的排泄量。更为关键的是，这些污染散布在全国的千万个农村，收集和处理困难。
随着生活水平的提高，肉禽在日常消费中的占比逐年提高，养殖业的规模随之不断增大，养殖业污染总量和所占污染的比重也呈上升态势。
浙江省畜牧局副局长戴旭明表示，嘉兴等地养殖业的突出问题是总量过大、单体规模过小，而随着猪肉价格的周期性波动，一些农户家无限制增大养殖密度，造成饲养量和饲养密度超过当地的环境承载能力。
嘉兴一直致力于养猪业"减量提质"规模化发展，并采取无害化、"河长制"等方式处理病死猪，但巨大的污染量和分布广泛的污染源造成的污染问题很难解决。
观察人士指出，此次黄浦江死猪漂浮事件反映出多方问题：农村养殖业发展缺乏科学引导，环保监管部门对农村面源污染缺乏有效的监管机制。
一些养殖户缺乏环保意识也加剧了养殖业造成的污染。嘉兴许多养殖户为了方便，随意丢弃猪粪、死猪，造成环境恶化。而江南水系的贯通性特征，则让这种乱丢行为造成跨界污染事件。
中国畜牧专家指出，这一事件表明，养殖业造成区域性水质、环境污染的风险在加大，中国亟须采取
措施应对这一新挑战。
信息来源：口岸信息快递
