基因组学与应用生物学，2020年，第39卷，第11期，第5194-5200页
研宄报告
Research Report
云南省主要烟区正番前斑萎病毒属…i m s )病毒的调查和检测 于海芹刘勇黄昌军^
云南省烟草农业科学研究院，国家烟草遗传工程研究中心，烟草生物技术育种重点实验室，昆明，650021 * 通信作者，***************
摘要2014年2月至2018年7月间从云南文山、昭通、楚雄、曲靖、玉溪、昆明、红河、大理和保山等州 市烟区的烟株及烟田周边作物和田间杂草采集疑似感染正番茄斑萎病毒属病毒的566个 样品。通过E L I S A血清学检测、分子生物学检测等方法，对该566个样品进行了系统检测检测结果发现 属病毒己在73：南烟区广泛分布，但危害以番前斑萎病毒(T o m a/o T S W V)为主，检出率为43.88%，番前环纹斑点病毒(T oma/o T Z S V)为辅，检出率为27.87%。结果同 时表明云南烟区马铃薯、辣椒、番茄、鸢尾、鬼针草等为烟草T S W V和T Z S V的重要中间寄主。该研宄阐明 了云南烟草斑萎病的危害和分布特点，为下一步制定针对该属病毒的防治措施奠定了良好基础。
澳门游玩攻略 3日游关键词正番前斑萎病毒属调查
Investigation and Detection o f Orthotospoviruses in Major Tobacco-growing Areas o f Yunnan Province
Y u Haiqin Liu Y o n g H u a n g C h a n g j u n*
Key Laboratory of Tobacco Biotechnological Breeding, National Tobacco Genetic Engineering Research Center, Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciencer, Kunming, 650021
*Corresponsingauthor,***************
DOI: 10.13417/j.gab.039.005194
Abstract T o identify the viruses in tobacco a nd other crops or w e e d s around tobacco field exhibiting orthotospo-virus-like s y m p t o m, 566 samples from W e n s h a n,Z h a o t o n g,C h u x
i o n g,Qujing,Y u x i,K u n m i n g,H o n g h e,Dali and B a o s h a n in Y u n n a n province wer e collected during2014 to 2018. E L I S A and molecular assay by using orthoto-spovirus universal primer a nd sequencing w e r e carried out to identify the presence of virus.T h e results of the 566 samples w e r e systematically detected by E L I S A a nd molecular biology s h o w e d that Orthotospoviruses distributed over Y u n n a n province a nd the Tomato spotted wilt virus(T S W V)and Tomato zonate spot virus(T Z S V)are the m o s t c o m m o n pathogen in tobacco spotted wilt disease.There are43.88% of samples we r e infected by T S W V and27.87% of samples w e r e infected b y T Z S V.T h e results also indicated that patato,pepper,t o m a t o,iris,Bidens pilosa are the important host plants for both T S W V a n d T Z S V.This study demonstrated the occurrence and distribution of the Orthotospoviruses in Y u n n a n tobacco g r o wing region,and shed light to the appropriate m a n a g e m e n t strategies of the Orthotospoviruses control to limit virus spread in tobacco in the next step.
Keywords Orthotospoviruses,Investigation
正番茄斑萎病毒属病毒是寄主毒病毒，属于布尼亚病毒目(Bunyavirales)番茄斑萎病 范围最广、发生最为严重的一类植物负义链R N A病毒科(Tospoviridae)(Lefkowitz et al.,2018)。其代表种
基金项目：本研究由中国烟草总公司云南省公司项目(2018530000241004)资助
引用格式：Y u H.Q., Liu Y.，a n d H u a n g C.J., 2020, Investigation a n d detection o f in m a j o r tobacco-g r o w i n g areas o f Y u n n a n province, Jiyinzuxue Y u Y i n g y o n g S h e n g w u x u e (G e n o m i c s a n d A p p l i e d Biology), 39(11): 5194-5200 (于海序，刘勇，黄昌 军，2020，云南省主要烟区正番茄斑萎病毒属病毒的调查和检测，基因组学与应用生物学，39(11): 5194-5200)
石南省主要烟区正番前斑萎病毒属病毒的调查和检测 5195
番前斑萎病毒（Tom 也o lu 'ras ，TSWV )于1915年在澳大利亚首次报道(Brittlebank , 19丨5>。现 已在巴西、阿根廷、意大利、法
国
、美国等多个国家和
地区发生危害(Brittlebank , 1915)。
中国于20世纪90年代首次发现T
S W V
(姚革， 1992，中国烟草,(4): 2-4)。目前,T S W V 己从中国最初
被发现的四川省(姚革，丨992，中国烟草,(4): 2-4)向国
内其他省市快速扩展，云南(董家红等，2010，中国植
物保护学会,P P .765)、广东(饶雪琴等，2010)、北京(李
飞等，2012)、宁夏(曹金强等，2016，中国蔬菜，（4):
87-89)、山东(李洁等,2017)。黑龙江(王凯娜等，20丨9)等
多个省市地区都有发现，造成重大的经济损失。
Ort /jofos /j o w i n M e s 能侵染超过84科1090种植
物，包括重要的粮食及经济作物，如烟草、番茄、辣
椒、马铃薯、花生、芹菜、大豆、南瓜、莴苣和桔梗等
(Sivaprasad et al ., 2017; Srinivasan et al ., 2017; W a n
etal .,2017)。其引起的典型症状为幼嫩叶片扭曲，植
南浦大桥图片
株矮化，顶芽下垂，叶片黄化且会出现坏死斑，直到
整株枯死(佟爱仔等,2012)。因为，其巨大的危害性，
2011年T S W V 被列为全世界危害最重的十大植物
病毒之一(Scholthof et al .，2011)。
烟草产业是云南省的重要经济支柱，为明确正 番茄斑萎病毒属病毒分布，本研究对云南文山、昭 通、楚雄、曲靖、玉溪、昆明、红河、大理和保山等州市 进行田间病害调查，并采集疑似感染正番茄斑萎病毒 属病毒的样品利用T
S W V
单抗和番茄环斑病毒 (Tomato
T Z S V
)多抗进行血清学检
测，并选取部分血清学阴性样品进行R T -P
C R
分子
生物学检测，发现了其他多种Ort /ioftwpcwiruses 。
1结果与分析
1.1田间症状鉴定正番茄斑萎病毒属病毒在烟草上有较为独特的
症状特征，主要表现为感病烟株的叶片畸形，整个叶
片以主叶脉为中轴，不对称生长，叶片上出现坏死斑
和同心环纹；主叶脉弯曲且沿叶脉出现花边状的
坏死；叶面不平整，呈现皱缩现象；整个植株矮化
(图1)。烟株到后期顶芽会萎蔫下垂，通常同一侧的多
片烟叶出现密密麻麻的坏死斑，整个烟株矮化，呈
“偏头”状。
在番茄上表现为，叶片出现坏死斑和同心环纹，
在果实上出现明显的同心环纹，果实畸形，不能完全
成熟(图1)。在辣椒上表现为，叶片出现坏死斑和同
心环纹，叶片皱缩，果实畸形(图丨）。在马铃薯上表现
为，叶片出现坏死斑，叶片从基部出现黄化，植株矮
化(图1)。在田边杂草和周边园艺作物上的症状表现
为叶片出现坏死斑和同心环纹，叶面不平整，呈现皱
缩现象(图1)。
1.2样品采集和EL 1S A 鉴定2014年2月至2018年7月间从云南文山、楚 雄、曲靖、玉溪、昆明、红河、大理和保山等州市采集 疑似感染正番茄斑萎病毒属的566个烟草，烟田旁 的杂草和其他作物样品(表1)。通过E L I S A 检测，其
F G H
图
1
不同作物上Ort/iotospouinises 属病毒的侵染症状
注:A -C ：烟草;D ~E ：番痴;F ：辣椒;G :
生菜;H
:
马铃薯；丨：鬼针草
Figure 1 S y m p t o m s o f Orthotospoviruses infection o n different crops
Note: A ~C : T o b a c c o ; D ~E : T o m a t o ; F: Pepper; G : Lettuce; H : Potato; I : B id e n s p ilo s
a
5196 基因组学与应用生物学
表1采集样品的T S W V和T Z S V E L I S A检测 T a b l e 1 T S W V a n d T Z S V E L I S A test o f s a m p l e s
采样地点
S a m p l i n g location 寄主
H o s t plant
样品数
T h e n u m b e r
o f s a m p l e s
T S W V阳性数
T h e positive n u m b e r
o f T S W V
T Z S V阳性数
T h e positive n u m b e r
o f T Z S V
采集时间
Acquisition
time
文山西畴烟草390332014-5 X i c h o u, W e n s h a n T o b a c c o
文山西畴杂草6042014-5 X i c h o u, W e n s h a n W e e d s
文山西畴番茄6062014-5 X i c h o u, W e n s h a n T o m a t o
文山麻栗坡烟草云烟87240202014-5 M a l i p o, W e n s h a n Y u n y a n87
文山麻栗坡番茄8042014-5 M a l i p o, W e n s h a n T o m a t o
文山马关烟草云烟87190122014-5 M a g u a n, W e n s h a n Y u n y a n87
文山马关鬼针草3022014-5 M a g u a n, W e n s h a n B i d e n s bipinnata
红河弥勒烟草260182014-5 Mile, H o n g h e T o b a c c o
红河弥勒田边杂草5022014-5 Mile, H o n g h e W e e d s
红河蒙自烟草K326150122014-5 M e n g z i, H o n g h e K326
红河蒙自辣椒3032014-5 M e n g z i, H o n g h e P e p p e r
红河蒙自田边杂草6022014-5 M e n g z i, H o n g h e W e e d s
红河炉西烟草261802014-8 Hux i, H o n g h e T o b a c c o
红河炉西大豆2002014-8 Hux i, H o n g h e S o y b e a n
红河炉西白菜3002014-8 Huxi, H o n g h e C a b b a g e
昆明寻甸烟草K326252102015-6 X u n d i a n, K u n m i n g K326
昆明寻甸辣椒3302015-6 X u n d i a n, K u n m i n g P e p p e r
昆明寻甸四季豆3002015-6 X u n d i a n, K u n m i n g B e a n
昆明寻甸萝卜2002015-6 X u n d i a n, K u n m i n g R a d i s h
昆明寻甸南瓜花(蓟马）3302015-6 X u n d i a n, K u n m i n g P u m p k i n flowers (Thrips)
昆明宜良烟草190162015-6 Yiliang, K u n m i n g T o b a c c o
昆明宜良辣椒4042015-6 Yiliang, K u n m i n g P e p p e r
73：南省主要烟区正番前斑萎病毒属(O r f)病毒的调查和检测5197
续表1
C o n t i n u i n g table 1采样地点寄主样品数T S W V阳性数T Z S V阳性数采集时间
S a m p l i n g location H o s t plant T h e n u m b e r T h e positive n u m b e r T h e positive n u m b e r Acquisition
o f s a mples o f T S W V o f T Z S V time
昆明盘龙鸢尾5042016-7
天山天池风景区介绍
Panlong, K u n m i n g Iris
昆明盘龙烟草7232018-7
Panlong, K u n m i n g T o b a c c o
楚雄姚安烟草121012014-7
Yao'an, C h u x i o n g T o b a c c o
楚雄姚安辣椒3302014-7
Yao'an, C h u x i o n g P e p p e r
楚雄姚安番茄3302014-7
Yao'an, C h u x i o n g T o m a t o
楚雄牟定烟草241602014-7
M o u d i n g, C h u x i o n g T o b a c c o
楚雄牟定番前4302014-7
M o u d i n g, C h u x i o n g T o m a t o
楚雄元谋烟草云烟97161202014-7
Y u a n m o u, C h u x i o n g Y u n y a n97
楚雄元谋番茄6642014-7
Y u a n m o u, C h u x i o n g T o m a t o
楚雄元谋鬼针草3102014-7
Y u a n m o u, C h u x i o n g B i d e n s bipinnata
玉溪研和烟草K326，云烟87,343002014-5; 2015-6; 2016-5 Y a n h e,Y u x i云烟85，云烟97
K326, Y u n y a n87,
Y u n y a n85, Y u n y a n97
绵阳天气预报15天
玉溪研和杂草18332018-7
广元天气Y a n h e,Y u x i W e e d s
玉溪江川烟草K326，云烟87302332014-7; 2015-6 Jiangchuan, Y u x i K326, Y u n y a n87
玉溪江川生菜4302014-7; 2015-6 Jiangchuan, Y u x i C a b b a g e
玉溪江川牛皮菜2002014-7;2015-6 Jiangchuan, Y u x i C h a r d
玉溪澄江烟草云烟87, K326272302014-7; 2015-6 Chengjiang, Y u x i Y u n y a n87, K326
玉溪澄江生菜4202014-7; 2015-6 Chengjiang, Y u x i C a b b a g e
玉溪澄江辣椒4302014-7; 2015-6 Chengjiang, Y u x i Pe p p e r
玉溪通海烟草K326261602014-7
Tonghai, Y u x i K326
玉溪通海辣椒4402014-7蚌埠旅游十大景点排名
Tonghai, Y u x i P e p p e r
玉溪通海大棚番茄5502014-7
Tonghai, Y u x i G r e e n h o u s e to m a t o
5198 基因组学与应用生物学
续表1
Continuing table 1
采样地点
S a m p l i n g location 寄主
H o s t plant
样品数
T h e n u m b e r
o f s a m p l e s
T S W V阳性数
T h e positive n u m b e r
o f T S W V
T Z S V阳性数
T h e positive n u m b e r
o f T Z S V
采集时间
Acquisition
time
曲靖陆良烟草K J26343202014-8 Luliang, Q u j i n g K326
曲靖陆良秋马铃薯5402014-8 Luliang, Q u j i n g A u t u m n Potato
曲靖陆良番前5302014-8 Luliang, Q u j i n g T o m a t o
曲靖富源烟草云烟87，周边杂草6242018-7 F u y u a n, Q u j i n g Y u n y a n87, W e e d s
大理弥渡烟草红花大金元8602015-6 M i d u, Dali H o n g h u a d a j inyuan
保山隆阳烟草云烟875502015-6 L o n g y a n g, B a o s h a n Y u n y a n87
昭通昭阳烟草及周边杂草121202018-6 Z h a o y a n g, Z h a o t o n g T o b a c c o a n d w e e d s
合计566277160-
Total
中在文山州，红河州蒙自、弥勒全部为T Z S V的侵染，
而在昆明、玉溪，曲靖和楚雄大部分为T S W V侵染，
但在部分区域同时检测到了 T S W V和T Z S V。而在
昭通、大理、保山仅发现T S W V的侵染，呈现明显的
地域特征。
在玉溪江川，2014年采集到了复合侵染T S W V
和T Z S V的样品，但在2015年没有发现T Z S V，仅检
测到了 T S W V的存在。本研究连续两年的采样数据表
明,T S W V有取代T Z S V成为主流病害的趋势(表1)。
1.3分子生物学检测
为了明确其他疑似症状的样品侵染源，本研究利 用分子生物学方法，对采集的部分T S W V和T Z S V 血清学呈阴性的样品，利用通用引物d T o s p o-F2/ d T o s p o-R2'引物对(表2)进行R T-P C R检测。琼脂糖 凝胶电泳结果显示,T S W V阳性的样品R T-P C R扩 增产物呈现清晰的条带，大小在300 b p左右，与预期 大小一致，阴性对照没有出现任何条带。
在昆明的水鬼蕉、玉溪鬼针草、辣椒和鸢尾样品 中扩增到了和阳性大小差不多的条带(图2)。表明这 些样品疑似有的侵染，但因为 T S W V和T Z S V血清学呈阴性，因此怀疑为其他种 的因此，将以上样品所获得条带割 胶回收后进行克隆测序发现，昆明的水鬼蕉样品中
3 4 5 6 7 8
图2部分T S W V和T Z S V血清学呈阴性的样品的分子生物学 检测
注：1：昆明水鬼蕉;2〜3：玉溪鬼针草;4〜5：玉溪辣椒;6：玉溪驾 尾;7：阳性对照;8：阴性对照
Figure 2 S o m e o f the T S W V a n d T Z S V serological negative s a mples w e r e tested in molecular biology
Note: 1: K u n m i n g Hymenocallis littondis', 2~3: Y u x i Bidens bip-innata； 4~5: Y u x i pepper; 6: Y u x i iris; 7: Positive control; 8: N e gative control
的序列与N C B I中报道的朱顶红褪绿环斑病毒〇/屮-('/z/orahc H C R V
)冋源性达到
