•基础研究・
孙要军孙博健张艳霞弓昌平李圆孙丙毅
心肌梗死时及时的再灌注是抢救梗死心肌唯一有效的途径，可以使频临坏死的危险区心肌细胞得到挽救。但是，缺血心肌的再灌注还会引发心肌更为严重的损伤，增大梗死面积，称之为心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury,MRI）O研究证实，再灌注期活性氧&reactive oxygen species,ROS）的进一步形成是造成包括心脏本身在内，机体各脏器氧化损伤的主要原因之一甲醛是日常家装后最常见的室内空气污染物，也是室内氧化剂的重要来源，吸入甲醛会导致组织器官的氧化损伤'2（。本研究将从检测脑组
织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）与谷胱甘肽过氧物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性以及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量的变化来反映心肌缺血再灌注对脑组织产生的损伤。同时模拟心肌梗死患者生活环境中甲醛吸入对其损伤产生的影响，并使用还原型谷胱甘肽（GSH）干预期望对脑组织具有一定的保护作用。
1材料与方法
1.1药品、试剂与仪器:GSH购自Sigma公司,40%甲醛购自济南鲁康化学有限公司，MDA、SOD与GSH-Px检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所,HX-200动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）,722-100型紫外分光光度仪（上海光学仪器厂）。
1.2实验动物及分组：取6~8周成年雄性SD大鼠（购自山西医科大学实验动物中心），体质量（200±10）g。随机分为假手术组，心肌缺血-再灌注组，心肌缺血-再灌注GSH干预组，心肌缺血-再灌注甲醛吸入组，心肌缺血-再灌注甲醛吸入GSH干预组，心肌缺血-再灌注溶剂对照组（0.9%氯化钠注射液组），每组动物6只，共6组36只。
1.3制备心肌缺血-再灌注模型：以25%乌拉坦（1g/kg）腹腔注射麻醉动物，经口腔气管插管机械通气，仰卧位固定。建立股静脉输液通路。连接心电仪检测！导联心电图％随后开胸，以活结结扎冠状动脉前降支（LAD）30min，心电图显示ST段抬高为结扎成功。随后拉开活结恢复前降支血运3h后实验D01:10.11655/zgywylc2020.23.006
基金项目：山西省T331工程”重点学科建设计划
作者单位*030001太原，山西医科大学基础医学院生理学系（孙要军）；山西医科大学第一医院院长
办公室（孙博健）-山西医科大学基础医学院（张艳霞、李圆）；太原市第六十二中学校（弓昌平）；中化二建集团医院内科（孙丙毅）结束。冰上操作留取脑组织,-80W保存。
1.4甲醛吸入与GSH干预：制作心肌缺血-再灌注模型时，结扎冠状动脉前降支的同时开始吸入21mg甲醛直至再灌注结束，持续3.5h%研究证实，只有在再灌注早期实施的药物干预等措施可以减轻再灌注损伤'3（。因此，我们取再灌注开
始后最初1min内将溶有GSH（给药剂量120mg/kg）的0.9%氯化钠注射液1ml经股静脉注入体内进行干预％
1.5脑组织MDA含量）SOD与GSH-PX活性检测：标本自-80W取出，研为脑组织匀浆，加入预冷4W双蒸水2ml 混匀，以10000r/min低温离心10min后取上清，分别使用 检测试剂盒对MDA、SOD、GSH-Px含量或活性进行检测，严格按照试剂盒说明书进行操作，以紫外分光光度法分别在532nm、550nm、340nm处测定吸光度（！）值，从而得出脑组织中的含量％
1.6统计学分析：所得数据采用SPSS15.0统计软件进行分析％检测结果以表示，多组样本比较采用单因素方差分析，以#<0.05为差异有统计学意义％
2结果
2.1大鼠心肌缺血-再灌注对脑组织MDA、SOD和GSH-Px 含量/活性的影响：与假手术组相比，缺血-再灌注组SOD和GSH-Px活性减弱,MDA含量明显增加，差异有统计学意义（#<0.05）%与缺血-再灌注组或生理盐水组相比，缺血-再灌注GSH干预后SOD与GSH-Px酶活性有所恢复,MDA含量减少，差异有统计学意义（$<0.05）（表1）%
2.2大鼠MRI同时吸入甲醛对脑组织MDA、SOD及GSH-Px含量的影响：在心肌缺血-再灌注的整个过程中吸入甲醛会加重脑组织的氧化性损伤，脑内SOD与GSH-Px活性进一步下降,MDA含量更高，差异有统计学意义（$<0.05）%在再灌注初静脉滴注GSH后以上改变减轻，使脑组织SOD及GSH-Px活性增加,MDA含量下降，差异有统计学意义（$< 0.05）（表2）%
3讨论
心肌梗死是心血管内科最常见的急性不可逆损伤性疾病％及时的再灌注是抢救缺血心肌的唯一有效途径％然而研究发现缺血心肌的再灌注不仅仅可以挽救梗死后的缺血心肌，同时还会引发心肌更为严重的不可逆损伤，即MRI% Schluter等'1（研究证实,MRI 的发生机制与再灌注期大量
表1再灌注初静脉滴注GSH对大鼠脑组织MDA SOD GSH-Px含量的影响G±s)
组别只数MDA(nmol/g)S0D(U/mg)GSH-Px(U/mg)假手术组618.6±0.923.6±0.912.4±0.4
缺血-再灌注组653.0±0.7a13.0±0.9a8.1±0.4C
缺血-再灌注+GSH组635.5±2.4晶19.5±0.8ab11.4±0.4晶0.9%氯化钠注射液组653.7±4.7C12.7±0.6a8.3±0.6C
西园寺世界
注:C与假手术组比较!<0.05；b与缺血-再灌注组比较!<0.05
表2GSH干预对大鼠MRI同时吸入甲醛对脑组织MDA SOD GSH-Px含量的影响(!±$)
组别只数MDA(nmol/g)S0D(U/mg)GSH-Px(U/mg)缺血-再灌注组653.0±0.713.0±0.98.1±0.4
缺血-再灌注+甲醛组674.5±2.4C8.5±0.5C7.4±0.4C
缺血-再灌注+甲醛+GSH组662.3±2.1b12.H±2.5b9.4±0.H b 注："与缺血再灌注组比较!<0.05；b与缺血-再灌注+甲醛组比较!<0.05
ROS的过度形成、细胞内钙超载、胞质中钙蛋白酶的水解活性增强⑷及冠状动脉微循环障碍冈等相关。特别是再灌注早期急剧增加了的ROS是造成心脏及全身各组织细胞蛋白质、脂质和DNA氧化性损伤的主要原因之一。脑是机体需氧耗氧 量最高的脏器，同时脑组织不饱和脂肪酸含量最丰富冋，神经元GSH)G*等抗氧化物质储备水平较低，具有对缺血缺氧敏
感，易受到氧化损伤等特点。当心肌缺血-再灌注发生时，心泵功能下降，使脑组织血供减少，继之心肌再灌注发生时，触发机体大量形成ROS，极易引发脑组织氧化损伤。
甲醛是室内氧化剂的重要来源之一，多由室内装修后缓 慢释放产生。甲醛是机体正常的代谢产物，微量甲醛可以由细胞代谢而解毒。但是长期吸入甲醛对人体健康会产生多方面的不利影响，甚至会加重患者病情，促使组织ROS产生增加，降低人体抗氧化能力，导致脂质过氧化，产生组织氧化性损伤叫日本福岛变异人哪去了
正常时机体组织细胞代谢产生少量O9,，由SOD催化生成H2O2，并在GSH-Px等的作用下将HQ?还原为水和分子氧，使体内ROS的产生和清除处于动态平衡。当体内活性氧H2O2生成增多时，将激活Nrf2等转录因子的表达，介导氧化应激响应，启动包括SOD、GSH-P x、CAT、NOS、NADPH氧化酶等在内的抗氧化酶链系统不同基因的转录表达，从而发挥抗氧化作用，抑制ROS过量生成，减轻机体氧化应激然而，心肌缺血-再灌注或甲醛吸入冈都会激发体内大量ROS 形成，特别是此时H2O2过量产生，机体处于氧化应激状态，SOD、GSH-P x等抗氧化酶大量消耗，使机体清除ROS能力下降，造成组织细胞脂质膜过氧化形成MDA，蛋白质变性、DNA损伤，继而引起细胞肿胀、变性、坏死、凋亡，产生不可逆组织损伤。 MDA含量的变化可以直接反映机体的脂质过氧化速率和强度+SOD则是体内唯一可以清除O2、的抗氧化酶，与GSH-P x共同清除过量生成的H k O2，SOD和GSH的活性大小可以间接反映细胞清除活性氧
和自由基的能力[10]o GSH是体细胞内广泛存在的具有抗脂质过氧化作用的低分子肽。它可以通过GSH-P x阻断比。2形成-OH，抑制脂质过氧化[7]+因此，GSH是生物抗氧化防御系统中的重要成员，也是最有效的外源性自由基清除剂。
本实验结果表明，心肌缺血再灌注可以造成脑组织脂质 过氧化产物MDA含量增加，SOD与GSH-Px活性下降，对脑组织产生氧化性损伤。当心肌缺血-再灌注的同时吸入甲醛则会使脑组织中MDA含量进一步增加，SOD与GSH-Px活性明显下降，脑组织损伤加重。而在再灌注早期静脉给予GSH则可以明显减轻脑的氧化性损伤，GSH具有较强抗氧化作用，从而对脑组织产生保护作用。
综上，心肌缺血再灌注造成自身损害的同时，会对远隔脏器造成氧化性损伤，加之甲醛等室内氧化剂的侵害，特别是对缺血缺氧及ROS敏感的脑组织损害更加明显，使用自由基清除剂可以减轻损伤。因此，在心肌梗死患者的救治过程 中，在改善患者心肌缺血的同时，积极干预，减轻再灌注损伤，既要关注心脏，同时也需要关注其他重要脏器的防护，还需注意改善环境状况，避免由于环境甲醛等有害污染物加重患者病情。
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火山岛漳州攻略(收稿日期：2020-07-24)
CyclinD1在胃腺瘤型息肉向胃腺癌转化过程中的意义 张瑜李志强吕小燕
有研究者发现，胃腺癌的进展及预后与Cyclin D1的表达有着密切的关联性巴世界卫生组织(WHO)分类将胃腺癌癌前病变分为低级别上皮内瘤变和高级别上皮内瘤变，其中隆起性病变称为腺瘤型息肉，腺瘤根据分化方向分为肠型和胃型叫胃腺瘤型息肉占胃息肉的10%~25%[3'4]，好发于胃窦部。大多数胃腺瘤发生在萎缩性胃炎与肠化生的背景下，通常被认为是胃癌的癌前病变。对于腺瘤型息肉摘除后的病例，仍应每年做胃镜检查随访，以便及时发现新生长的病灶并切除以免发展为恶性。本文主要通过免疫组织化学法检测胃腺瘤型息肉及胃腺癌和肿物周围正常胃黏膜组织中Cyclin D1的表达情况，分析三者之间的表达差异及进展关系$
1材料及方法
1.1临床资料：收集2016年12月至2019年12月山西省中医院病理科组织标本胃腺瘤型息肉56例，其中男性30例，女性26例；年龄32~84岁，平均(54±10)岁。胃腺瘤型息肉中伴低级别上皮内瘤变者33例，高级别上皮内瘤变者23例。胃腺癌组织标本78例，其中男性43例，女性35例；年龄40~ 75岁，平均(54±12)岁$所有胃癌患者病理类型均为腺癌，其中高分化型13例，中分化型40例，低分化型25例。肿物周围正常胃黏膜标本56例。4组性别、年龄对比均差异无统计学意义(Q0.05)$
1.2试剂：CyclinD1(RMA-0541)购自福州迈新生物有限公司,DAB(PV6000D)显试剂盒购自北京中杉金桥公司。在LEICA(BONO-MAX)免疫组化自动染机完成。
1.3方法：标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，连续4!m厚切片，在二甲苯及梯度乙醇溶液中连续脱蜡至水洗。CyclinD1的染步骤严格按照试剂盒的说明书进行，用已知的阳性片作为阳性对照，采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。
D01:10.11655/zgywylc2020.23.007
水帘峡风景区游玩攻略基金项目：山西省自然科学基金(201801D121301)
作者单位:030012太原，山西省中医院病理科(张瑜)，药剂科(李志强)，脾胃科(吕小燕)
通信作者：吕小燕,Email：*****************1.4结果判定：免疫组织化学染结果建立在组织阳性对照
实验成立的基础上，阳性染结果是指组织切片中特定染部位细胞核上显示棕黄着，阳性细胞数大于5%，且无背景染，阴性染结果为组织内预期细胞中未见棕黄着或阳性细胞数小于5%$结果由2位高年资病理医师在光学显微镜下对染后切片进行观察判读，并进行统计学分析。
1.5统计学分析：采用SPSS21.0软件进行统计学处理和分析,Cyclin D1在胃腺瘤型息肉与胃腺癌及癌旁正常胃组织的表达差异采用方差分析。！＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1CyclinD1在胃腺瘤、胃腺癌及正常胃黏膜中的表达:Cy-clinD1在正常情况下表达于上皮组织的增殖区，内皮和一些成纤维细胞中，呈黄至棕黄颗粒，主要表达在细胞核。在本次收集的病例中：33例胃腺瘤型息肉伴低级别上皮内瘤变中CyclinD1阳性表达率为23%,23例胃腺瘤型息肉伴高级别上皮内瘤变中CyclinD1阳性表达率为40%$CyclinD1在胃腺癌中阳性表达率高达79%$而在瘤旁正常胃黏膜中的表达低于5%$
龙潭湖公园2.2CyclinD1在胃腺瘤型息肉和胃腺癌的阳性比较:Cy-clinD1在胃腺癌和胃腺瘤型息肉的阳性率远远高于肿瘤周围正常的胃黏膜组织，差异具有统计学意义(e=0.3260,P= 0.0247)，而且随着病变的进展，其阳性表达率逐渐升高，在胃腺癌中肿瘤的分化程度越低，其CyclinD1的表达就越高,Cy-clinD1在胃腺癌中的表达高于胃腺瘤型息肉，差异有统计学意义X=0.3420,P=0.0250)$见表1$
2.3CyclinD1在胃腺癌中的表达与临床特征的关系:Cy-clinD1在胃腺癌中的表达与组织学分级呈正相关，随着组织学分级的增高而增高，与分化程度负相关ce=0.2170,p= 0.0345)，与年龄、性别和浸润深度无关(y2=0.4320,P=0.0874)$ 3讨论
3.1胃癌的发生经过及癌前病变：胃癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一，发病和死亡例数均约占世界的50%[5]，是癌症防治的重点。密切监测胃癌前病变是预防和早期发现癌的关
